всеобщность
Иммунофиксация - это лабораторный тест, который позволяет идентифицировать и типизировать гамма-глобулины, присутствующие в биологическом образце.
Подробно, анализ позволяет изучать - в крови или моче пациента - классы иммуноглобулинов (IgA, IgG, IgM, IgE или IgD) и тип каппа или лямбда легкой цепи в соответствии с их специфической электрофоретической подвижностью., Впоследствии, для идентификации того, какой гамма-глобулин участвует, иммунофиксация включает в себя инокуляцию специфических антигенов для фрагмента или соответствующего антитела ( анти-иммуноглобулиновая антисыворотка ): наличие предполагаемого изменения подтверждается образованием осадка, видимого невооруженным глазом или микроскопом.
Эта информация имеет большое значение для установления, в частности, диагностики патологий плазматических клеток (гаммопатий или дискразий плазматических клеток). Иммунофиксация очень полезна для оценки и мониторинга множественной миеломы, макроглобулинемии Вальденстрема и первичного амилоидоза (также называемого амилоидозом легкой цепи).
какие
Иммунофиксация (или иммуноэлектрофорез, также сокращенно обозначаемый аббревиатурой IFE ) представляет собой метод, позволяющий определить, присутствует ли и какой класс иммуноглобулинов (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) или типа каппа или лямбда легкой цепи, в избыток или дефект сыворотки крови и мочи пациента.
Каппа- и лямбда-легкие цепи характеризуют моноклональный компонент, то есть антитела с одинаковой идентичной химической структурой.
Иммунофиксация сыворотки и мочи: когда это указано?
Плазмоклеточные дисплазии или гаммопатии представляют собой гетерогенную группу расстройств неизвестной этиологии, характеризующихся:
- Диспропорциональная пролиферация клона В-клеток ;
- Наличие в сыворотке и / или моче определенного типа иммуноглобулина (или его полипептидной субъединицы), структурно и электрофоретически однородного ( моноклонального ).
Как правило, плазменные дискразии диагностируются с помощью электрофореза сывороточных и мочевых белков с последующей иммунофиксацией сыворотки (IFE).
В то же время для определения общей концентрации иммуноглобулинов (IgG + IgM + IgA) можно назначить анализ крови.
Чтобы узнать больше: иммуноглобулины - что это такое, как они измеряются и контрольные значения »Иммунофиксация: основной принцип
Иммунофиксация - это исследование, которое включает две фазы (сначала электрофорез в агарозном геле, затем иммунопреципитация со специфической антисывороткой ).
Первый этап иммунофиксации такой же, как и при ЭЛЕКТРОФОРЕЗЕ белков (или протидограмм), поэтому необходимо помнить некоторые концепции:
- Электрофорез - это лабораторный анализ, который позволяет определить количество белков, присутствующих в сыворотке крови или в других биологических образцах, и для каждой фракции выявляет наличие каких-либо аномалий с точки зрения качества. В частности, этот экзамен позволяет разделить белки на пять групп: альбумин, альфа 1 глобулин, альфа 2 глобулин, бета глобулин и гамма глобулин ; последние исследуются более конкретно с помощью иммунофиксации.
- Электрофорез - это метод разделения, основанный на различной скорости миграции электрически заряженных частиц через раствор и инертную опорную среду под воздействием электрического поля, создаваемого постоянным током. На практике экзамен использует электрический заряд и молекулярную массу белков, присутствующих в образце пациента. Под воздействием электрического поля эти макромолекулы мигрируют и «группируются» по типу, характерным образом реагируя на стресс. Результат ( электрофоретическое отслеживание ) состоит из различных пиков и кривых, которым соответствуют фракции белка. Обычно первый пик, более высокий и более узкий, это альбумин ; чтобы следовать, мы наблюдаем пики глобулина, намного ниже, чем альбумин. Увеличение или уменьшение амплитуды и интенсивности пиков, которые образуются на пути, указывают на большее или меньшее присутствие белков в каждой категории; чем больше белков присутствует в полосе, тем выше соответствующий пик. В случае гамма-глобулинов, если кто-то хочет знать количество каждого из различных классов (IgA, IgM, IgG и т. Д.), Необходимо прибегнуть к однократной дозировке. Как правило, чем больше гамма-глобулинов присутствует в полосе, тем выше соответствующий пик; высота соответствует общему количеству белков, принадлежащих к определенной категории.
ИММУНОФИССИЯ обеспечивает:
1) Электрофорез в агарозном геле: образец пациента (сыворотка или моча) наносится на электрофоретическую полоску, то есть опору для миграции (обычно в агарозном геле). Благодаря приложению электрического поля, генерируемого постоянным током, достигается разделение на разные полосы. На практике каждый тип гамма-глобулина, присутствующего в смеси (то есть в образце пациента), мигрирует в зависимости от молекулярной массы и электрического заряда. Различная электрофоретическая подвижность гамма-глобулинов позволяет идентифицировать их (каждый из них совпадает с определенной полосой на электрофоретическом пути) и наблюдать любые аномалии.
2) Иммунопреципитация со специфической антисывороткой (фиксация) : специфические антигены для конкретного антитела или фрагмента добавляются индивидуально к каждой электрофоретической полоске (анти-IgG, анти-IgA, анти-IgM, анти-легкая каппа или анти-цепь) лямбда легкая цепь). Если присутствует моноклональный белок, то при взаимодействии антигена с соответствующим антителом образуется узкая полоса (это значит, что результат положительный) и образование осадка, видимого невооруженным глазом или микроскопом. Наконец, образец обрабатывается (т.е. промывается и окрашивается), чтобы удалить белки, которые не выпали в осадок, чтобы получить высыхание геля и приступить к считыванию результатов.
Почему это работает
Для чего нужна иммунофиксация?
Иммунофиксация сыворотки - это исследование, предназначенное для диагностики или мониторинга заболеваний, характеризующихся изменением гамма-глобулинов, особенно когда речь идет о продукции моноклонального компонента ( моноклональная гаммопатия ).
Чтобы узнать больше: моноклональные гаммопатии - что и что »Иммунофиксация полезна в случаях подозрения на дискразию плазматических клеток и является фундаментальной для изучения МИОЛОМЫ (и связанных с ними патологий) и MGUS (сокращение от «моноклональные гаммопатии неопределенного значения»).
Этот тест также позволяет нам оценить макроглобулинемию Вальденстрема и амилоидоз легких цепей ( AL ).
Иммунофиксация: когда назначено обследование?
Показание к иммунофиксации следует за клиническими или лабораторными данными, которые вызывают подозрение на изменения моноклональных антител или иммуноглобулинов в сыворотке или моче.
Например, этот экзамен позволяет углубить результат серозащитного или мочевого электрофореза: когда при электрофоретическом отслеживании полосы, соответствующие гамма-глобулинам, отклоняются от нормы, иммунофиксация идентифицирует, какой из этих белков изменен, с точки зрения количества и качество.
Итак, иммунофиксация сыворотки может быть назначена:
- В случае, когда другие лабораторные анализы дают ненормальный результат, с точки зрения отсутствия или меньшего и большего количества белков плазмы по отношению к норме;
- При подозрении на наличие заболеваний, характеризующихся продукцией моноклонального компонента, таких как:
- Множественная миелома и ее варианты;
- Макроглобулинемия Вальденстрема;
- Амилоидоз;
- Когда у пациента развиваются симптомы и признаки, которые предполагают наличие моноклональной гаммопатии или множественной миеломы, таких как:
- Боли в костях;
- Анемия;
- Легкая усталость;
- Рецидивирующие инфекции;
- Необъяснимые переломы.
В случае множественной миеломы электрофорез белков и иммунофиксация имеют большое значение также для мониторинга развития заболевания (последующее наблюдение).
Иммунофиксация: на каких образцах можно провести?
Биологические образцы, которые могут быть подвергнуты иммунофиксации, в основном:
- Сыворотка (сывороточная иммунофиксация);
- Моча (мочевая иммунофиксация);
- Ликер * (иммунофиксация ликвора).
* Примечание : CSF или спинномозговая жидкость - это жидкость, которая проникает и защищает головной мозг, спинной мозг, черепные нервы и корешки позвоночника.
Нормальные значения
ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ результат иммунофиксации сыворотки и мочи для моноклональных или поликлональных гамма-глобулинов считается нормальным .
Гамма глобулины
Гамма-глобулины составляют 9-20% всех белков плазмы.
- Контрольная величина гамма-глобулина : 0, 9-1, 4 г / дл
Что касается общей концентрации иммуноглобулинов ( IgG + IgM + IgA ), считается, что значения между 600 и 2300 мг / дл являются нормальными.
- Эталонное значение иммуногобулинов в сыворотке крови :
- IgA : 90-400 мг / дл
- IgG : 800-1800 мг / дл
- IgM : 60-280 мг / дл
- IgD : 0, 3-0, 4 мг / дл
- IgE : 20-440 мг / дл
Примечание : референтный интервал экзамена может незначительно отличаться в зависимости от возраста, пола и инструментов, используемых в аналитической лаборатории. По этой причине желательно обратиться к диапазонам, перечисленным непосредственно в отчете. Следует также помнить, что результаты анализов должны оцениваться в целом врачом общей практики, который знает историю болезни пациента.
Высокие значения - причины
Увеличение гамма-глобулинов может быть:
- Поликлональные, если продуцирование иммуноглобулинов является гетерогенным, то есть все компоненты гамма-глобулинов - продуцируемых или происходящих из разных плазматических клеток - подвержены увеличению;
- Моноклональные, когда гамма-глобулины производятся или происходят из одного типа (клона) плазматических клеток.
Увеличение поликлональных гамма-глобулинов может быть связано с:
- Хронические воспалительные заболевания;
- Ревматоидный артрит;
- Системная красная волчанка;
- Хронические заболевания печени (такие как гепатит и цирроз);
- Острые и хронические инфекции;
- Последние прививки;
- Некоторые опухолевые заболевания.
Высокие значения моноклональных гамма-глобулинов могут указывать вместо этого на наличие:
- Некоторые новообразования и хронические воспаления;
- Множественная миелома;
- лимфом;
- Макроглобулинемия Вальденстрема.
Избыток гамма-глобулина называется гипергаммаглобулинемией, а недостаток - гипогаммаглобулинемией .
Низкие значения - причины
Уменьшение гамма-глобулинов может указывать на наличие различных заболеваний иммунной системы на генетической основе, включая агаммаглобулинемию или вторичный иммунодефицит (например, СПИД, почечная недостаточность, острый сепсис и синдром Кушинга).
Снижение значений гамма-глобулина также может зависеть от применения цитостатических препаратов, иммунодепрессантов и стероидов.
Как это выполняется
Иммунофиксация сыворотки
Иммунофиксация сыворотки включает в себя простое взятие крови из вены руки. Сыворотка получается путем центрифугирования биологического образца; это позволяет, фактически, отделить фракцию, содержащую клетки (корпускулярная часть), от жидкой крови (плазмы). В сыворотке крови отсутствуют факторы свертывания крови (фибриноген, фактор VIII, фактор V и протромбин).
Иммунофиксация мочи
Для проведения иммунофиксации мочи необходимо собрать небольшое количество мочи в специальный стерильный контейнер. На основании показаний врача и лаборатории, образец может быть взят без точного ( случайного ) времени или в течение 24 часов .
Иммунофиксация ликера
Анализ требует забора небольшого количества спинномозговой жидкости через введение иглы в полость позвоночника ( люмбальная пункция ).
подготовка
Иммунофиксация: как вы готовитесь к экзамену?
- Перед забором крови в некоторых лабораториях может потребоваться соблюдать пост не менее 10-12 часов. В течение этого времени допускается небольшое количество воды.
- Иммунофиксацию можно проводить на моче, собранной в определенное время суток (произвольно) или в течение 24 часов, поэтому необходимо заранее получить соответствующие стерильные контейнеры.
- Что касается иммунофиксации раствора, то вместо этого никакой особой подготовки не требуется.
Что может изменить результат экзамена?
Некоторые лекарства могут влиять на результат иммунофиксации, поэтому желательно сообщать о любых текущих лекарствах врачу.
За шесть месяцев до обследования введение вакцин (иммунизация) и использование таких препаратов, как фенитоин, прокаинамид, оральные контрацептивы, метадон и терапевтический гамма-глобулин, могут повысить концентрацию иммуноглобулинов. Другими лекарственными средствами, которые могут изменить результат теста, являются кортикостероиды, неомицин, ацетилсалициловая кислота и хлорпромазин.
Интерпретация результатов
Результат иммунофиксации оценивается в сочетании с результатами других анализов. Интерпретация результатов является обязанностью врача общей практики или специалиста, который может идентифицировать и сравнить изменения, влияющие на определенный гамма-глобулин (например, полосу, которая совпадает с иммуноглобулинами G), при определенных заболеваниях. Эта оценка подтверждает или подтверждает диагностическую гипотезу: в общем, иммунофиксация может выявить нормальный профиль гамма-глобулина или идентифицировать моноклональный белок или поликлональную модель .
Как только болезнь определена, иммунофиксация может быть выполнена для:
- Мониторинг заболевания с течением времени, а затем следовать его ходу (наблюдение);
- Проверьте эффективность терапевтического протокола .
Плюсы и минусы иммунофиксации
По сравнению с электрофорезом белка, иммунофиксация:
- Это быстрее : результаты иммунизации обычно получают в течение трех часов;
- Он более чувствителен (хотя и незначительно): иммунофиксация может выявить иммуноглобулин, исключенный из электрофореза белка, особенно при низких концентрациях (менее 1 г / л).
Кроме того, иммунофиксация:
- Это может быть частично автоматизировано ;
- Это легко читается и интерпретируется .
Однако иммунофиксация дороже, чем электрофорез белков, и позволяет проводить анализ только гамма-глобулина .
Нормальный результат
При иммунофиксации нормальный путь включает в себя:
- Полоса, которая совпадает с более темным иммуноглобулином G ( IgG );
- Полоса, соответствующая наиболее легкому иммуноглобулину А ( IgA );
- Отсутствие полосы для иммуноглобулина М ( IgM );
- Каппа- лента более плотная, чем лямбда (легкая цепь), с соотношением 2: 1.
При нормальном результате полосы большие, и наблюдается постепенное и равномерное снижение плотности цвета по краям полосы иммуноэлектрофореза.
Поликлональные гамма-глобулины
В некоторых случаях все полосы иммунофиксации равномерно закрыты в одинаковой степени. Эта модель представляет наличие поликлональных иммуноглобулинов . Также в этом случае полосы широкие и переход к краям иммуноэлектрофорезной полоски постепенный. Полоса IgM - обычно отсутствует - широкая.
Моноклональные гамма-глобины
Когда узкая полоса с острыми краями может быть идентифицирована на пути иммунофиксации, это означает, что поиск моноклональных компонентов является положительным .
Идентификация моноклонального иммуноглобулина полезна при диагностике следующих состояний:
- Моноклональная гаммопатия неопределенного значения (MGUS);
- Множественная миелома;
- Макроглобулинемия Вальденстрема;
- Амилоидоз.
Кроме того, иммунофиксация может быть использована для мониторинга терапии при плазменных дискразиях (то есть множественной миеломе и макроглобулинемии Вальденстрема). Если уровень моноклонального белка уменьшается или не обнаруживается после химиотерапии, это может указывать на реакцию на лечение . Напротив, моноклональный белок, сохраняющийся несмотря на лечение, является признаком рефрактерного заболевания .
Пожалуйста, обратите внимание . Отрицательный результат иммунофиксации не всегда исключает дисплазию плазматических клеток. Например, несекреторная множественная миелома или олигосекретор может дать отрицательные результаты как в моче, так и в сыворотке крови. Поэтому, если диагностическое подозрение на гаммопатию все еще велико, указывается определение отношения легких цепей каппа / лямбда (отношение K / L ).
Иммунофиксация и диагностика рассеянного склероза
Иммунофиксация спинномозговой жидкости (ликвора) назначается, когда врач подозревает наличие рассеянного склероза . В этом случае определяемый путь является характерным, поскольку он подчеркивает наличие так называемых олигоклональных полос . Результат сообщается в лабораторном отчете как положительный . Следует учитывать, что полосы обычно не наблюдаются при иммунофиксации сыворотки, поскольку они коррелируют с продукцией интратекальных гамма-глобулинов .
Тем не менее, следует отметить, что эти данные не обязательно подтверждают диагноз, так как могут возникнуть другие состояния с олигоклональными полосами в спинномозговой жидкости.
Другими словами, идентификация олигоклональных полос с ликворной иммунофиксацией очень полезна для подтверждения диагноза рассеянного склероза, но должна быть подтверждена другими исследованиями . Другими состояниями, которые могут обеспечить этот результат, являются воспаления центральной нервной системы, в том числе: энцефалит, связанный с ВИЧ, нейросифилис, нейросаркоидоз, менингоэнцефалит Лайма, злокачественные новообразования ЦНС, нейромиелит зрительного нерва и поперечный миелит.
