Эссе ABTS
Это аналитический метод, который использует спектрофотометрическое измерение для определения антиоксидантной способности образца. С помощью спектрофотометра UV-Vis измеряется поглощение раствора, содержащего радикал ABTS • +, генерируемого окислением ABST (2, 2'-азинобис (3-этилбензотиазолин-6-сульфоната), бесцветного вещества в форме радикалы окрашиваются путем поглощения на длинах волн характеристик в видимом диапазоне. Добавление к раствору ABTS + + молекул антиоксидантов, которые могут действовать путем переноса как водорода, так и электрона, определяет приведение радикала к бесцветной форме, с последующим обесцвечиванием реакционной смеси. Это отбеливание, пропорциональное количеству присутствующего антиоксиданта, может быть измерено как уменьшение поглощения в течение определенного времени на определенной длине волны (734 нм). Мощность антиоксиданта выражается в сравнении с значения поглощения, измеренные для известных количеств молекулы антиоксиданта, выбранной в качестве эталонного стандарта, которым обычно является аскорбиновая кислота или тролокс (в данном случае мы говорим об антиоксидантной активности TEAC Trolox.
Преимущество измерения антиоксидантной мощности, основанное на использовании ABTS, заключается в простоте и быстроте. Кроме того, он позволяет измерять гидрофильные и липофильные антиоксиданты в широком диапазоне рН. Однако следует иметь в виду, что используемый радикал (ABTS +) не является физиологическим и не присутствует в биологических системах и что проблемы повторяемости измерений из-за кинетики реакции различных участвующих антиоксидантов часто выделяются.
FRAP (антиоксидантная сила железа)
Тест FRAP измеряет восстанавливающую способность антиоксидантов против ионов железа. Это метод, основанный на переносе электронов, при котором ионы железа переходят из Fe3 + в Fe2 +. При определенных условиях pH (3, 6) и в присутствии TPTZ (2, 4, 6-трис (2-пиридил) -s-триазина) эти ионы образуют комплексы с различными характеристиками, в частности восстановленное производное (Fe2 + -TPTZ) предполагает синий цвет, который имеет максимальное поглощение при 593 нм, что может быть измерено спектрофотометрически. Следовательно, восстановительная способность антиоксидантного вещества может быть измерена как изменение оптической плотности раствора, содержащего окислитель, на длине волны, установленное путем сравнения с изменением относительно стандарта (например, аскорбиновой кислоты).
Тест FRAP был разработан для измерения восстановительной способности плазмы, но затем был адаптирован для проверки антиоксидантной способности чистых соединений и сложных матриц. Фактически, поскольку этот метод позволяет оценить только восстановительную способность при переносе электронов, полностью игнорируя действие антиоксидантов, которые действуют через перенос водорода, он не позволяет измерить вклад молекул, таких как тиолы и белки, которые играют антиоксидантную роль фундаментальный в биологических жидкостях (например, крови). Преимущество использования этого метода заключается в том, что он является одним из самых простых, быстрых и наименее дорогих методов определения антиоксидантной способности in vitro.
DPPH TEST
2, 2-дифенил-1-пикрилгидразил (DPPH •) является очень стабильным и коммерчески доступным азотным радикалом, характеризующимся интенсивным пурпурно-красным цветом, который тускнеет при уменьшении в присутствии молекулы с антиоксидантной способностью. Посредством спектрофотометрического измерения при 517 нм изменения поглощения раствора DPPH после реакции с антиоксидантным соединением можно количественно определить восстанавливающую способность испытуемого вещества, независимо от того, действует ли оно на перенос водорода или перенос электрона. Результат обычно выражается в виде IC50, то есть количества антиоксиданта, способного снизить начальную концентрацию DPPH на 50%.
Это быстрый, простой и недорогой метод. Пределы этого аналитического метода определяются тем, что результаты анализа искажаются в случае, когда исследуемые молекулы поглощают в одном и том же диапазоне длин радикала DPPH, или в присутствии больших молекул, стерически перемешанных, которые не они вступают в реакцию с реактивной частью радикала. Это заставляет DPPH реагировать с антиоксидантами в 1000 раз медленнее, чем пероксильные радикалы.
PCL TEST (фотохемилюминесценция)
Тест PCL основан на реакции определенного вида радикалов, супероксидного аниона (O2 • -), генерируемого фотохимически УФ-излучением, с соединением, способным излучать хемилюминесценцию. Используемый маркер - люминол, молекула, которая при окислении свободными радикалами излучает свет, который можно измерить с помощью специального прибора (Photochem®). Присутствие антиоксидантных веществ в рационе смеси дезактивирует радикальные частицы, препятствующие эмиссии хемилюминесценции. Анализ PCL очень быстрый и чувствительный. Кроме того, с применением двух различных аналитических протоколов, называемых ACW (антиоксидантная емкость, растворимая в воде) и ACL (антиоксидантная емкость, растворимая в липидах), вклады в общую антиоксидантную емкость водорастворимого компонента (флавоноиды, витамин Е) могут быть измерены для одного и того же соединения. С, аминокислоты и т. Д.), Чем жирорастворимые (токоферолы, токотриенолы, каротиноиды и т. Д.). Антиоксидантная способность исследуемого продукта получается путем сравнения значений, записанных с измерениями, относящимися к стандартным эталонным молекулам, аскорбиновой кислоте для протокола ACL и Trolox для протокола ACW.
